Tạo dòng phân tử cDNA của gen mã hóa Gibberellin 20-oxidase từ cây arabidopsis thaliana

Abstract

cDNA sợi đơn của gen GA20 mã hóa cho enzym Gibberellin 20-oxidase tổng hợp từ mARN tổng số tách chiết từ cây Arabidopsis thaliana được dùng làm khuôn để nhân gen GA20 nhờ cặp mồi đặc hiệu thiết kế dựa theo trình tự nucleotide của gen GA20 công bố trên Ngân hàng gen (mã số AK221496). Sản phẩm PCR nhân gen được gắn vào vector tách dòng pBT-TA và biến nạp vào tế bào vi khuẩn E.coli TOP10. Các dòng tế bào mang gen quan tâm được sàng lọc bằng các kỹ thuật: nuôi cấy trên môi trường chọn lọc, tách chiết plasmid và cắt kiểm tra plasmid bằng enzym giới hạn, giải trình tự nucleotide. Trình tự nucleotide của gen GA20 được phân lập từ cây Arabidopsis thaliana trong nghiên cứu này có tỷ lệ tương đồng cao (98-99,6%) so với các trình tự nucleotide của gen GA20 công bố trên Ngân hàng gen.